井伊直虎是远江井伊谷城主(国人)井伊直盛的女儿，母为新野亲矩之妹祐椿尼。幼名不明，出生年份不明，推测天文5年(1536年)前后诞生。
早年出家
天文11年(1542年)，井伊直虎的祖父井伊直宗因为今川义元的命令参与三河国田原城的攻城战
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